超广谱β-内酰胺酶及AmpC酶研究进展

革兰阴性杆菌耐药机制复杂，发展迅速，按照与临床紧密结合的BJM分类，β-内酰胺酶(BLA)中主要为染色体和质粒介导的Ⅰ型AmpC酶和Ⅱ型中的超广谱β-内酰胺酶。随着β-内酰胺类抗生素的广泛应用，菌株产生新的BLA并可引起流行，故其检测受到临床重视。     

多重-PCR检测CTX-M超广谱β-内酰胺酶基因

目的建立一种多重PCR方法在肠杆菌中检测所有组的CTX-M基因。方法设计两组引物可分别在两个区域检测所有CTX-M组的大多数blaCTX-M基因。一条四组CTX-M基因的共同保守区引物与另外四条逆向引物或五条逆向引物一起同时使用可分别检测出每一组特异性CTX-M基因。PCR反应混合物体积25 ul含每条引物25 pM。对6株标准菌株(产CTX-M-26的肺炎克雷伯菌1株,分别产CTX-M-3,CTX-M-9及CTX-M-15的大肠杆菌各1株,产CTX-M-14的大肠杆菌2株)和90株临床分离株进行CTX-M检测。结果已知携带CTX-M的菌株作为标准均获得预期PCR产物,对90株临床分离株应用多重-PCR扩增,有68株获得阳性结果。进一步测序及分析显示,这些基因均为编码CTX-M-15超广谱β-内酰胺酶的基因。结论我们已成功设计一种多重PCR在单一反应管可同时检测多种CTX-M基因无须多次PCR反应。此方法可以快速准确检测出ESBLs表型阳性菌中CTX-M基因。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药相关性

目的了解革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的情况及其耐药性，指导临床合理用药。方法K—B法检测184株革兰阴性杆菌对11种抗生素的耐药性；采用头孢西丁（FOX）药敏纸片进行AmpC酶的初筛，通过酶提取物三维试验方法确证产AmpC酶细菌；采用NCCLS推荐的纸片扩散确证试验检测184株革兰阴性杆菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况。结果184株革兰阴性杆菌中，AmpC酶阳性率为23．3％主要产生菌为鲍曼不动杆菌57．7％，铜绿假单胞菌37．5％，AmpC酶阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、复方新诺明（SXT）、左旋氧氟沙星（LEV）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、头孢他啶（CAZ）、阿米卡星（AK）、头孢吡肟（FEP）、美洛培南（MEM）的耐药率分男11为94．7％、86．8％、84．2％、81．6％、71．0％、68．4％、68．4％、55．3％、50．O％、5．3％；38株大肠埃希菌和26株肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性率分别为42．1％、23．1％，ESBLs阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、复方新诺明（SXT）、头孢他啶（CAZ）的耐药率较高。对头孢吡肟（FEP）、阿米卡星（AK）、头孢西丁（FOX）、美洛培南（MEM）的耐药率较低，对左旋氧氟沙星（LEV）的耐药率大肠埃希菌则远高于肺炎克雷伯菌。结论在革兰阴性杆菌中，AmpC酶和ESBLs产生情况已相当严重，应重视对其的检测；产酶菌与非产酶菌对抗生素的耐药性有明显区别；临床用药以碳青霉烯类如美洛培南（MEM）为首选。     

广泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因和oprD2基因检测及同源性分析

目的探讨本院短期内分离的广泛耐药铜绿假单胞菌药物耐药基因和外膜蛋白基因opr D2携带情况,并分析其分子流行病学特征。方法收集本院2012年10月分离的对临床常用7类抗菌药物耐药或中介的非重复铜绿假单胞菌,采用K-B法检测药物敏感性,选出广泛耐药株和泛耐药株。采用PCR法检测β-内酰胺酶基因(OXA、CTX-M、TEM、PER、GES、DHA、IMP、VIM、NDM、SPM、CARB和KPC)、16S rRNA甲基化酶基因(arm A、rmt A、rmt B)、氨基糖苷类修饰酶基因(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ)及opr D2基因,PCR扩增阳性产物进行DNA测序,用Blast进行序列比对分析。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对泛耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果共筛选出23株广泛耐药铜绿假单胞菌,其中泛耐药菌10株。23株广泛耐药铜绿假单胞菌中,耐药基因检测阳性的有OXA-1群、OXA-10群、TEM、PER、CARB、VIM、arm A、rmt B、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,阳性率分别为21.7%、39.1%、47.8%、87.0%、26.1%、4.3%、8.7%、47.8%、60.9%、52.2%、47.8%。opr D2基因阳性8株,阴性15株,基因缺失率达65.2%(15/23)。阳性基因与Gen Bank中已知序列同源性均大于99%。10株泛耐药菌的PFGE图谱分为4个型,其中主流型A型有6株,B型2株,C型、D型各1株,且A型、B型均来自烧伤外科。结论我院2012年10月分离的广泛耐药铜绿假单胞菌携带多种耐药基因和外膜蛋白opr D2基因缺失是其耐药的主要原因之一,且存在多种耐药基因组合模式。同时我院发生了小规模的泛耐药铜绿假单胞菌克隆株的传播。     

人猪链球菌感染致脑膜炎1例

本文报道一例猪链球菌感染所致脑膜炎病例。患者为屠宰工,主要症状为头痛、意识障碍,发热。因脑脊液中分离出猪链球菌而确诊。患者采用药敏试验敏感的万古霉素和青霉素治疗后痊愈出院。     

甲胎蛋白和GGT-Ⅱ联合检测在肝癌患者诊断中的意义

目的：探讨两种肝癌标志物甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）和γ-谷氨酰转移酶同工酶Ⅱ（γ-glutamyltransferase isoenzymeII,GGT-Ⅱ）单独检测和联合检测原发性肝癌（primaryhepatocellularcar cinoma,PHC）的早期诊断价值。方法：GGT-Ⅱ检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,AFP检测采用电化学发光免疫分析法。分别对33例乙型肝炎患者,30例肝炎后肝硬化患者,44例原发性肝癌患者以及35名健康体检者进行GGT-Ⅱ和AFP检测,综合分析2项指标对PHC的诊断价值。结果：PHC组的GGT-Ⅱ和AFP的阳性率均明显高于肝硬化组、肝炎组和健康对照,差异有统计学意义（P〈O．01）,联合检测敏感性高于单一检测指标。结论：血清GGT-Ⅱ及AFP联合检测可提高PHC的诊断灵敏度,提高肝癌的早期检出率。     

肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶耐药基因研究

目的了解肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性及16S rRNA甲基化酶检出情况。方法收集中南大学湘雅医院2009年1-7月非重复肺炎克雷伯菌96株,采用琼脂稀释法对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的最低抑菌浓度（MIC）进行检测;聚合酶链反应（PCR）扩增16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA。结果肺炎克雷伯菌对阿米卡星、庆大霉素及妥布霉素的MIC50分别为256 μg/mL、512 μg/mL和512 μg/mL;MIC90均为＞512 μg/mL;耐药率分别为21.88%、63.54%、41.67%。68株（70.83%）菌至少对1种药物耐药,21株（21.88%）菌对3种药物均耐药。22株（22.92%）菌armA基因扩增阳性,未扩增到rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA基因;22株armA阳性菌株中,17株（77.27%）对3种氨基糖苷类抗生素均耐药。armA阳性株与armA（FJ410928.1）基因序列同源性为100%。结论携带armA型16S rRNA甲基化酶基因是肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要机制之一。     

冠心病患者的血小板参数相关变化及临床意义

目的探讨冠心病(CHD)患者血小板参数的变化。方法采用Beckman Coulter Gen’s-Ⅱ型血细胞分析仪测定70例CHD患者(其中心绞痛组(AP)35例;急性心肌梗死组(AMI)35例),以及35例健康体检者(健康对照组)外周血中血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)及血小板比容(PCT)。结果两组不同类型CHD患者的MPV、PDW均明显高于对照组(P<0.05),PLT明显低于对照组(P<0.05),MPV与PLT呈负相关,PDW与MPV呈正相关。结论监测CHD患者的血小板参数的相关变化对CHD的预防、诊治及预后有重要的临床意义。     

2015—2021年CHINET链球菌属细菌耐药性监测

目的 了解2015—2021年国内主要地区医疗机构临床分离链球菌属细菌对抗菌药物的耐药性。方法 对国内主要地区51所医院临床分离的链球菌属采用纸片扩散法（K-B法）或E试验方法或自动化商业药敏测试系统，按CHINET统一监测方案进行抗菌药物敏感性试验，并按2022年CLSI折点标准统计分析总结。结果 2015—2021年共收集到89 684株链球菌属细菌，包括肺炎链球菌35 254株（39.3%）,β溶血链球菌42 563株（47.6%），草绿色链球菌11 767株（13.1%）。42563株β溶血链球菌中A群、B群以及未能鉴定分型的链球菌分别为39.8%、52.8%、7.4%。非脑脊液样本儿童患者分离的25 552株肺炎链球菌中青霉类敏感、中介、耐药（PSSP、PISP、PRSP）菌株的检出率分别为86.2%～97.7%、1.7%～6.5%和0.6%～7.3%，在成人患者7 997株中的检出率分别为92.0%～95.1%、3.8%～5.3%和1.4%～2.7%。脑脊液分离肺炎链球菌PRSP占比81.2%。无论是脑脊液或非脑脊液分离儿童和成人的肺炎链球菌对红霉素和克林霉素高度耐药，耐药...     

自身免疫性肝病相关抗体检测及其临床意义分析

长期以来，有为数不少的肝病患者因病因不明或治疗效果不佳（包括少量病毒感染阳性患者）导致病情加重，给病人造成巨大痛苦。近年来国内外报道自身免疫性肝病的发病率有升高趋势，随着检测手段的提高发现这部分肝病患者中不乏此类疾病。自身免疫性肝病是一组病因不明的慢性肝脏疾病，分自身免疫性炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、原发性硬化性胆管炎（PSC）三大类。